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        《中国家禽》 2020年06期
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        鸡llnnccRRNNAA--CCEEPPTT8启动子验证及活性核心区域筛选

        金晶  余昕健  靳锴  李婷婷  张晨  左其生  李碧春  
        【摘要】:研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、pGL3-p5),分别转染DF-1细胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体pGL3-p4与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1 174~-1 bp处为启动子,且-627~-429bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。

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